操作方法：對潔淨車間用食品廠臭氧機{車間臭氧機}滅菌1小時後（hòu）進（jìn）行沉降菌檢測

名稱：潔淨區微生物檢測操（cāo）作規程

關鍵詞（cí）：潔淨區、微生物檢測、食品廠臭氧機、車間（jiān）臭氧機

目 的：尋得優質食（shí）品（pǐn）廠臭氧機、車間臭氧機廠（chǎng）家 並規範（fàn）潔淨（jìng）區微生物檢測

背景知識：略

原（yuán）理：空氣源風冷臭氧滅菌（jun1）

適用範圍：100級、1萬、10萬、30萬（wàn）級潔淨區環境。

1.         沉降（jiàng）菌檢測

1)        在（zài）萬級潔淨區內的關鍵操作點和潔淨室內每周檢測一次沉降菌和浮遊菌；在10萬（wàn）級潔淨區（qū）內其檢測頻次為每月（yuè）檢測一（yī）次。30萬級每季度檢測一次沉降（jiàng）菌。

2)        由微（wēi）生物檢測員按《養基的配製操作規程的要求（qiú）配製肉湯瓊脂培養基，培養（yǎng）皿使用Φ90mm×15mm，於121℃濕（shī）熱滅菌20分（fèn）鍾，取出備用。

3)        做好潔淨區消毒工（gōng）作，開啟潔淨區淨化空調係統，正常運行不少於30分鍾；對（duì）單向流如100級的淨化工作台和層流（liú）罩要在（zài）淨化（huà）係統運行10min後開（kāi）始。

4)        靜態測試在除（chú）測試人（rén）員外，室內無生產人員的情況（kuàng）下進行，動態測試在已處於正常生產狀態下進行。

5)        采樣點布（bù）置選用對角線法，要求布置地麵四個方（fāng）向，工（gōng）作線上（shàng）左右，關鍵設備頂上放置一個。

6)        萬級、10萬級、30萬級的最少采樣點數可按下表確定。

在滿足最少測點數的同時，還宜（yí）滿足最少培養皿數，見下表

7)        百級區隻有淨化工作（zuò）台下的局部範圍，其麵積小於10m2，因此百級區取樣點至少為3個。

8)        測試人員按潔淨室級別規定的（de）程序更換潔淨服進入（rù）潔淨區；靜態測試時，室內人員不得多於2人。

9)        將製備好的肉湯瓊脂培養基按采樣點布點（diǎn）位置離地0.8～1.5m處放置，打開（kāi）培（péi）養皿蓋（gài），暴露（lù）30分（fèn）鍾，檢測人員及時填寫記（jì）錄，記錄房間溫（wēn）濕度，壓差及測試狀態。

10)     蓋好皿蓋，將培養皿倒置於恒溫培養箱內，在30～35℃中培養48小時，並用3隻培養皿作對照。

11)     用透（tòu）射光於培養皿背麵或正麵仔（zǎi）細觀察平皿上所有菌落數，要注意菌落與培養基沉澱（diàn）物的區別，然後用5～10倍放大鏡檢查有否遺漏。

12)     計算平均菌落數 =（M1＋M2……＋Mn）／n，式中 M1：1號培養（yǎng）皿菌落數，M2：2號培養皿菌（jun1）落數，n： 培養皿數。

13)     用（yòng）平均（jun1）菌落數判斷（duàn）潔淨室（shì）空氣中的微生物， 潔淨區的平均菌落數（shù）（靜（jìng）態測試）：100級≤1個/皿，萬級≤3個／皿，10萬級≤10個／皿，30萬級≤15個／皿。

14)     如超（chāo）過標準，則必須對此區域重新消（xiāo）毒，重新采樣兩次，測試結果均須合（hé）格；否則要向質量管理部經理通報，並采取相應的措施。

15)     檢測人員必須向QA部門（mén）發“潔淨級別檢測記錄”，取樣和微生物培（péi）養及（jí）檢測人員均要在記錄上簽（qiān）名，QA部門主管審核，記錄由質量管（guǎn）理部保存三年。

2.         浮遊菌檢測

1)        對萬級和10萬級潔淨區要進行（háng）浮遊（yóu）菌（jun1）的檢測，在萬級區內的關鍵操作點和潔（jié）淨室內每周檢（jiǎn）測一次，10萬級潔淨區內其檢測頻次（cì）為每月檢測一次。

2)        浮遊（yóu）菌取樣使用（yòng）浮遊菌采樣器，采樣（yàng）器必須要（yào）有流量計和定時量（liàng），並按儀器的檢（jiǎn）定周期，定（dìng）期對儀器作檢（jiǎn）定，以保證測試數據的可靠性（xìng）。

3)        采樣器進入被測房間前要（yào）先用消毒（dú）劑（jì）滅菌，用（yòng）於100級潔淨室的采樣器（qì）最好是（shì）一直放在房間內；采樣時使（shǐ）用規定為Φ150mm×15mm培養（yǎng）皿。

4)        由微生物檢測人員按《培養基的配（pèi）製操作（zuò）規程》的要求（qiú）配製營養瓊脂培養基，於（yú）121℃濕熱滅菌20分鍾，取出備用。

5)        浮遊菌取樣與沉降菌一樣可分為靜態測試（shì）和動態測試兩種狀態；各種潔淨度的采樣（yàng）點數目和最小采樣量如下表所示。

浮遊菌取樣點數目及最小采樣量（liàng）

6)        采樣點布點位置離地0.8～1.5m處放置，送風口測點位置離開送風麵30cm左右；可（kě）在關（guān）鍵設備或關鍵工作活動範圍增加測點；采樣點的布置與（yǔ）5)相同。

7)        對單向流（liú）如l00級淨化工作台，測試要在淨化空調係統正常運行（háng）不少於l0min後開始；對非單向流，如緩衝室、培養室，測試要在淨化空調（diào）係統正常運行不少於（yú）30min後（hòu）開始。

8)        采樣者必須穿（chuān）戴與被測潔（jié）淨區域相應（yīng）的工作服，在轉盤上放入或調換培養皿前，雙手要用消毒劑消毒；培養皿表麵必須嚴格消毒。

9)        采樣口及采樣管在（zài）使用前必須高溫滅菌，要用消毒劑消毒采（cǎi）樣器的頂（dǐng）盤（pán），轉盤以及（jí）罩子的內外麵；對采樣管的外壁和（hé）內壁進行消毒後，要將管中的殘留液倒掉並晾幹。

10)     儀器經消毒後先（xiān）不放入培養皿，先（xiān）接通電源，啟動真空抽氣泵抽氣不少於5min，使儀器中的殘餘消毒劑蒸發。

11)     調好（hǎo）流量，轉盤轉（zhuǎn）速，已知采樣（yàng）器的流量（liàng）（L/min ），設（shè）定采樣時間(min)，相乘即采樣（yàng）量(L)；關閉真空泵（bèng）。

12)     檢（jiǎn）查每個培養皿（mǐn）的質量，培養基及培養皿有變質、破損或汙染的不能使（shǐ）用，放（fàng）入（rù）培養皿，蓋上蓋子後調節采樣器縫隙高度。

13)     對於單向流或逆風口，采樣器采樣管口朝向應正對氣流（liú）方向（xiàng），對於非單（dān）向流采樣管口向上，布置采樣點時，至少應離開塵粒較集（jí）中的（de）回風口lm以上。

14)     除百級區外，在其他潔淨室采樣時，要（yào）在送風（fēng）口和關鍵部位各進行一次采樣，每（měi）個（gè）采樣點隻采樣一次（cì）。

15)     置采樣（yàng）口於（yú）采樣點後，開啟（qǐ）采樣器，采樣時，測（cè）試人員要站在采樣（yàng）口的下風側，靜態測試時，室內（nèi）人員不（bú）得多於2人。

16)     采樣結束後取出培（péi）養皿（mǐn），蓋上皿蓋並編號，注意（yì）防止采樣管對樣本的汙染；要用消毒劑噴射罩子的內壁和轉盤，將采（cǎi）樣過程記錄在“潔淨級別檢測記錄”上。

17)     全部采樣結束後，將培養皿（mǐn）倒置於恒溫（wēn）培養箱中30℃~35℃培養48h；每批培養基可選3隻培養皿作對照培養，檢驗培養（yǎng）基本身是（shì）否汙染。

18)     用肉眼直接計數，標記或（huò）菌落計數器上點計（jì），然後（hòu）用500倍放大鏡（jìng）檢查，有否遺漏，若平板上有2個或2個以（yǐ）上的菌落（luò）重疊，可分辨時（shí）仍以2個（gè）或2個以上菌落計數。

19)     浮遊菌評定標準：100級≤5/m3，萬（wàn）級≤100/m3，10萬級≤500/m3

20)     微生物檢測人在“潔淨級別檢測記錄”上記錄檢測數據，並交QA部門主管審批，每個測點的浮遊菌平均（jun1）濃度必須低於設定的潔淨度標準的規定。

21)     若某測點的浮遊菌平均（jun1）濃度超過評定標準，則必須對此區域先行消毒，然後重新（xīn）取樣兩次，兩次測試結果必須合（hé）格；否則要（yào）向（xiàng）質（zhì）量管理部（bù）經理通報，並要（yào）采取相應的措施。

車間淨（jìng）化（huà）無菌級別請參照國家消毒標準。